Avances Metodológicos Para El Estudio Microscópico Del Ganglio Espiral De Cetáceos

Abstract

El sistema de biosonar y, principalmente, el oído interno de los cetáceos sigue siendo objeto de investigaciones relacionados con su biología evolutiva, anatomía, fisiología y patología, cobrando actualmente, un gran interés el efecto de la contaminación acústica submarina sobre el mismo. Un parte fundamental, de naturaleza nerviosa, en el oído de los cetáceos odontocetos, es el ganglio espiral, el cual juega un papel fundamental en la transmisión del sonido, y por tanto en la audición de los cetáceos. El ganglio espiral está situado en el oído interno, que en estos animales se encuentra en el interior de la porción timpánica del complejo timpánico-periótico, el cual está compuesto principalmente por tejido óseo, por lo que es necesario su descalcificación para poder estudiar, correctamente, las estructuras del oído interno. De aquí, que el objetivo principal de esta tesis doctoral consistió en mejorar y estandarizar los protocolos de descalcificación de las estructuras óseas que albergan al oído interno con el fin de llevar a cabo el estudio morfológico e inmunohistoquímico del ganglio espiral en cetáceos odontocetos. Para ello se utilizaron 34 oídos procedentes de cetáceos, que se sometieron a 9 protocolos diferentes de descalcificación, utilizando ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido fórmico e Histofix® descalcificador 3 a distintas concentraciones y temperatura. Las muestras obtenidas fueron embebidas en parafina para su corte mediante microtomo convencional o, directamente sometidas a su corte en criostato. Las conclusiones de la presente tesis doctoral fueron: 1. Los protocolos que utilizan EDTA requieren tiempos más largos para la descalcificación del oído interno, a diferencia de los protocolos que emplean Histofix® descalcificador 3, que mostraron los tiempos más cortos para este proceso del oído interno de cetáceos odontocetos. 2. El aumento de la temperatura, en protocolos que utilizan EDTA, acorta el tiempo de descalcificación del oído interno de los cetáceos odontocetos estudiados. 3. La utilización de Histofix® descalcificador 3 y EDTA a temperatura ambiente, facilitó la descalcificación, conservando la estructura adecuada de la cóclea, para su inclusión en parafina y/o utilización en criostato, frente a protocolos que utilizaron EDTA a 4ºC o ácido fórmico a temperatura ambiente. 4. Los protocolos de descalcificación basados en EDTA ofrecieron la mejor morfología tisular para el estudio microscópico de los diferentes componentes del ganglio espiral. 5. El mejor protocolo para el mantenimiento antigénico (cantidad) y su detección inmunohistoquímica (calidad) fue aquel en el que las muestras fueron descalcificadas utilizando EDTA, tanto a temperatura ambiente como a 4ºC. 6. Inmunohistoquímicamente se demostró la presencia de antígenos de calretinina, HSP70 y nNOs en neuronas del ganglio espiral de cuatro cetáceos odontocetos de tres especies diferentes (Tursiops truncatus, Kogia breviceps y Delphinus delphis), lo que abre futuras investigaciones sobre la utilización de estos biomarcadores en casos de contaminación acústica.