Determinación de aminoácidos por cromatografía líquida de alta resolución : estudio cualitativo y cuantitivo de aminoácidos libres en algas y su variación por condiciones de cultivo

Abstract

En el presente trabajo se establece un método analítico, usando la Cromatografía Líquida de Alta Resolución, para la determinación cualitativa y cuantitativa de aminoácidos libres en algas y se estudia la aplicación de surfactantes para la mejora del método. Se estudia el efecto de la disponibilidad de nitrógeno en el medio de cultivo sobre la composición de aminoácidos libres, pigmentos y proteínas en la macroalga Ulva rígida y se comprobó que la limitación de nitrógeno en el medio de cultivo provoca una disminución muy marcada los contenidos de clorofilas a y b, proteínas totales y aminoácidos libres y que estos actúan como almacenamiento de nitrógeno cuando éste está disponible en el medio, para ser utilizado posteriormente cuando las condiciones se vuelven limitantes. Además se estudia el efecto de la variación del perfil de aminoácidos de la microalga Chlorella pyrenoidosa variando la fuente de carbono y por otro lado variando la fuente de nitrógeno. Se comprueba que la fuente de carbono varía considerablemente el contenido total en aminoácidos libres, así como su perfil y que la limitación de CO2 en los cultivos de Chlorella produce una reducción de los contenidos intracelulares de ácido glutámico, glutamina, ácido aspártico y asparagina. El contenido total en aminoácidos libres alcanza su valor máximo para los cultivos con amonio, seguido de los de nitrato y por último con urea. Sin embargo, el perfil no se ve afectado por la naturaleza de la fuente nitrogenada. Se determinan las características espectrofluorimétricas convencionales del derivado OPA-lisina en presencia de los surfactantes Brij 35, Brij 96, POLE, TX-100, HDTAB, NaLS y se comparan con las obtenidas en medios acuosos. Se observa que todos los surfactantes empleados aumentan considerablemente la señal de fluorescencia del derivado, obteniéndose los valores más elevados para el TX-100 y el POLE. (...)