Utilización de anticuerpos poli y monoclonales en la detección inmunohistoquímica de Mycoplama hyopneumoniae

Abstract

El diagnóstico definitivo de la neumonía enzoótica porcina (NEP) se realiza empleando técnicas laboratoriales, siendo los métodos directos los que nos permiten identificar al agente; Mycoplasma hyopneumoniae (M.h.). La detección por técnicas de Inmunoperoxidasa en tejidos fue empleada,por vez primera por Bruggman (1977a) en cortes por congelación, siendo Doster y Lin (1988) quienes la utilizaron en tejidos incluidos en parafina. El objetivo de este estudio fue detectar por Inmunohistoquímica (IHQ), antígenos de M.h. en muestras de pulmones de cerdos incluidas en parafina utilizando sueros hiperinmunes y anticuerpos monoclonales procedentes de distintos laboratorios nacionales e internacionales. En el estudio IHQ se utilizaron 1.- Como tejido control positivo, pulmones de cerdos procedente de una inoculación experimental con M.h. 2.- Muestras de pulmones con lesiones de NEP obtenidas en matadero, con y sin estudio microbiológico. 3.- Como control negativo, tráqueas de lechones obtenidas al nacimiento y cultivadas posteriormente. 4.- Como control positivo para CAR-bacillus, se empleó tráqueas de cabras W-S (+) e IHQ (+). Todas las muestras fueron fijadas en formol tamponado al 10% e incluidas en parafina. Los cortes se tiñeron con H-E y la técnica de impregnación argéntica Warthin-Starry (W-S) para la detección de CAR-bacillus. Para la detección IHQ se utilizó una batería de 9 sueros hiperinmunes anti-M.h., 2 monoclonales anti-M.h, 3 sueros hiperinmunes anti-CAR-bacillus, y el método de Streptavidina-biotina (Dako-SLAB) y con 3-amino-9 ethilcarbazole (AEC) como sustrato. Los resultados más significativos fueron: 1.- El tiempo de fijación y tipo de fijador influye significativamente en los resultados inmunohistoquímicos para la detección de Mycoplasma spp. y CAR-bacillus. 2.- La inmunoreacción para M.h. es granular, frente a la reacción filamentosa de CARbacillus. 3.- Salvo un suero hiperinmune, todos los demás mostraron reacciones de tipo filamentosas (W-S +) indicando la contaminación de estos sueros con anticuerpos anti-CARbacillus (Orós, J. et al. , 1997). 4.- Los anticuerpos monoclonales anti-M.h. no detectaron antígenos de M.h. en cortes embebidos en parafina, observándose reacciones inespecíficas intracitoplasmáticas. 5.- Nuestros hallazgos sugieren que es necesario controlar los conejos destinados a la creación de sueros hiperinmunes especialmente contra patógenos con tropismo respiratorio, así como el protocolo de elaboración, ya que proteínas que pueden estar presentes en dichos medios, pueden ser las causales de algunas reacciones inespecíficas.